Determinarea AZF deleții

400 LeiTG04
   Analiza medicală a microdeleţiilor cromozomului Y este considerată un diagnostic esenţial pentru studiul infertilităţii masculine. Studii recente au divizat braţul lung al cromozomului Y în 3 regiuni numite AZF (Azoospermia Factors), deleţii frecvent întâlnite la pacienţii cu azoospermie (absenţa spermatozoizilor în ejaculat) şi oligozoospermie severă (reducerea producţiei de spermatozoizi). Aceste regiuni (AZFa, AZFb şi AZFc) conţin gene care controlează etapele corecte ale spermatogenezei. Modificarea uneia sau a mai multor regiuni determină reducerea drastică a celulelor germinale până la absenţa lor completă. Diagnosticul de infertilitate masculină este suspicionat la pacienții cu azoospermie sau oligozoospermie, asociată cu morfologie şi/sau motilitate spermatică anormală, în absenţa altor cauze cunoscute.
   Pînă în prezent sunt descrise trei cauze genetice de infertilitate masculină:
  • anomalii cromozomiale: prezente la 5-10% dintre bărbații cu oligozoospermie și 10-15% dintre cei cu azoospermie; cea mai cunoscută anomalie este sindromul Klinefelter (47, XXY);
  • microdelețiile cromozomului Y: prezente la 10-18% dintre pacienții cu oligospermie sau azoospermie severă;
  • mutațiile genei fibrozei chistice (CFTR): se transmit autozomal-recesiv, anumite mutații pot determina: absența congenitală bilaterală a canalului deferent (CBAVD), absența unilaterală a acestuia fără manifestări pulmonare sau pancreatice (CUAVD) sau obstrucția canalului deferent;
Microdelețiile cromozomului Y constituie o cauză genetică de infertilitate recent descoperită. Majoritatea acestor anomalii apar de novo și datorită fenotipului asociat cu infertilitate nu sunt de regulă transmise descendenților.
Detecția microdelețiilor este importantă pentru pacienții care intenționează să beneficieze de o reproducere asistată prin ICSI (injecția intracitoplasmatică), deoarece există riscul ca aceste anomalii genetice sa fie transmise și descendenților, ca urmare a șuntării mecanismului fiziologic al fertilizarii.
Cromozomul Y, unul dintre cei doi gonozomi (cromozomi sexuali), conține 2% din ADN – ul  celular și are o lungime de ~60 milioane de perechi de baze. Are rol distinctiv în determinarea sexului masculin prin gena SRY, alcatuită dintr-un singur exon care codifică un factor de transcripție denumit TDF (testis determining factor). Mutațiile survenite la nivelul acestei gene dau naștere unui fenotip feminin cu cariotip 46,XY, iar translocația genei SRY pe cromozomul X induce un fenotip masculin cu cariotip 46,XX.
Subregiunea AZFa conține trei gene - UTY, USP9Y și DBY. În cazul bărbaților cu deleții în genele USP9Y și DBY diagnosticul este de azoospermie și SCO, la fel este și cazul deleției întregului locus. Această subregiune nu conține secvențe repetitive din acest motiv delețiile date se înregistrează în mai puțin de 5% din cazurile totale de deleții în cromozomul Y. sY84, sY86 și sY615 sunt markerii care ne permit identificarea delețiilor în subregiunea AZFa. Se consideră că este suficient să diagnosticăm un singur marker din cei enumerați mai sus, însă cu cât numărul markerilor este mai mare cu atât diagnosticul este mai exact, deaceea se recomandă diagnosticul a cel puțin 2: sY84 și sY86. Lipsa acestor 2 markerii demonstrează cu aproape 100 % deleția completă a subregiunii AZFa și prezența sindromului SCO de tip I, care se caracterizează prin lipsa totală a celulelor spermale în canalele seminale.
Subregiunea AZFb conține secvențe prezentate în o singură copie, secvențe înalt repetitive și secvențe palindromice inversate. În această subregiune este codificată gena RBMY care este prezentă în 30-40 de copii dintre care o parte din ele  sunt pseudogene. Deleții a unei sau a câtorva copii se depistează la bărbații cu azoospermie sau oligozoospermie severă. Cu toate că această genă a fost depistă și în alte locusuri de pe cromozomul Y, funcționale sunt doar cele din subregiunea AZFb. Produsul codificat de gena RBMY sintetizat din alte regiuni al cromozomului Y nu este recunoscut de anticorpii specifici. Delețiile în subregiunea AZFb au frecvența de 16 % printre totalul delețiilor cromozomului Y. Importanță diagnostică are deleția totală a subregiunii AZFb. În conformitate cu recomandările Academiei Europene de Andrologie lipsa a 2 markeri specifici acestei regiuni: sY127 și sY134, reprezintă deleția completă a subregiunii AZFb.
Delețiile în subregiunea AZFc  sunt cele mai frecvent întîlnite aproximativ 60% din toate delețiile cunoscute în cromozmul Y. Lungimea aceste subregiuni este de aproximativ 3,5 milioane perechi baze și este constituit din blocuri înalt repetitive organizate în structuri palindromice supuse frecvent delețiilor. În această regiune se codifică familia de gene DAZ (gene cu deleții în azoospermie). La bărbații cu mutații în 2 din aceste gene, dereglările în spermogramă sunt mai puțin evidențiate decât în cazul lipsei a 4 gene. Pentru delețiile b2/b4 în subregiunea AZFc sunt spefici doi markeri: sY254 și sY255, în cazul acestei deleții se pierd toate copiile genelor DAZ. În subregiunea AZFc a fost descris un nou tip de deleții în cromozomul Y și anume delețiile gr/gr în cazul căreia lipsește markerul sY1291. În cazul acestei deleții se pierde jumătate de subregiune AZFc. Purtătorii acestei mutații sunt supuși unui risc de 7 ori mai mare pentru dezolvtarea oligozoospermiei decât în cazul prezenței acestui marker și există un risc foarte înalt pentru dezvoltarea celulelor tumorale testiculare.
 
Citește mai mult

PCR RT/ reacția de polimerizare în lanț în timp-real

Sînge

DTlite Real-Time DNA-Technology

Pregatirea

Pregătirea

Nu necesită pregătire specială


Result

Rezultatul

Laboratorul medical Invitro Diagnostics oferă unul din cele mai detaliate Rapoarte de analize medicale din Republica Moldova. Raportul de analize medicale oferit conține mulți indici și parametri, valori de referință și variabile în dependență de profilul pacientului (vârstă, sex, unități de măsură, metoda utilizată și alte informații medicale specifice).

Pentru interpretarea rezultatelor analizelor, pacientul trebuie să apeleze obligatoriu la medicul curant care-i cunoaște antecedentele, rezultatele fiind doar o etapă în stabilirea diagnosticului.


Echipament utilizat

Echipament utilizat

DTlite Real-Time DNA-Technology
Amplificator automat. Oferă amplificare optimă și controlabilă în timp real

EquipmentMetoda - PCR RT/ reacția de polimerizare în lanț în timp-real.
EquipmentAmplificator într-o versiune compactă cu detecție în timp real DT-Lite produs de compania "DNK-Technology" este un sistem universal, modern, de înaltă tehnologie.
EquipmentPentru toate rezultatele, este disponibilă și o stare de procesare, care poate fi validată, tipărită sau transferată în LIS (sistemul de informații de laborator).

Analize conexe recomandate

Pentru a primi o imagine mai completă referitor la starea de sănătate a pacienților adesea medicii au nevoie să investigheze valorile mai multor parametri și inclusiv relațiile dintre ei, de aceea Invitro Diagnostics recomandă efectuarea următoarelor analize conexe.

CL201 zi300 Lei

Analiza spermei are rolul de a evalua fertilitatea masculină, în cadrul acestui test fiind stabiliţi parametrii caracteristici spermatozoizilor, dar şi ejaculatului în ansamblu. Indicaţiile spermogramei sunt duble: atât în cadrul investigaţiilor pentru testarea fertilităţii cuplului, cât şi pentru stabilirea succesului vasectomiilor.

CL231 zi1 400 Lei

    Determinarea gradului de fragmentare a ADN-ului spermatozoizilor este o analiza genetica importanta in investigatiile cuplului infertil. Integritatea genetică a spermatozoidului este esențială pentru dezvoltarea normală a embrionilor. Un nivel ridicat de fragmentare a ADN-ului în celulele spermatice pot afecta negativ clivajul embrionilor și de dezvoltare ulterioară care să conducă la blastocisti arestati sau avort spontan precoce. 

TG017 zile800 Lei

Trombofilia (uneori hipercoagulabilitatea) este o anomalie a sistemului de hemostază, care crește riscul de tromboze (cheaguri de sânge în vasele de sânge). Astfel de anomalii pot fi identificate la 50% dintre persoanele care au un episod de tromboză (cum ar fi tromboza venoasă profundă la nivelul piciorului), care nu a fost provocată de alte cauze. O proporție semnificativă a populației are o anomalie detectabilă, însă majoritatea acestora dezvoltă numai tromboze în prezența unui factor de risc suplimentar.
      Trombofilia ereditară reprezintă un grup de afecțiuni moștenite care predispun purtătorii acestor mutații la tromboze. Deficiențele ereditare de proteină C, proteină S și antitrombină, care au funcția de anticoagulante endogene au fost descoperite în urmă cu câțiva ani, însă prevalența acestora, chiar și la pacienții cu tromboză familială, este redusă. Descoperirea recentă a două trombofilii relativ frecvente, rezistența la proteina C activată asociată cu o genă anormală a factorului V (factor V Leiden) și varianta 20210A a genei de protrombină au crescut substanțial probabilitatea identificării unui factor predispozant ereditar la pacienții cu tromboembolism. Nivelurile modest ridicate ale homocisteinei plasmatice, determinate în mare parte genetic, au fost, de asemenea, recent asociate cu un risc crescut de tromboembolism venos. O predispoziție la tromboză poate fi acum identificată într-o minoritate substanțială de pacienți cu tromboembolism venos și la majoritatea pacienților cu tromboză familială și există suficiente dovezi că mai multe defecte coexistente sunt prezente la persoanele cu cea mai mare tendință de tromboză.
     Panelul de gene include următoarele polimorfisme:
  • Gena F2/ protrombina (factorul II de coagulare), polimorfism 20210 G>A
  • Gena F5/ proaccelerina (factorul V de coagulare), polimorfism 1691 G>A / Arg506Gln
  • Gena F7/ proconvertina sau convertina (factorul VII de coagulare), polimorfism 10976 G>A / Arg353Gln
  • Gena F13A1/ fibrinaza (factorul XIII de coagulare), polimorfism 103 G>T / Val35Leu
  • Gena FGB/ fibrinogen (factorul I de coagulare), polimorfism -455 G>A
  • Gena ITGA2-α2/ integrina (receptor trombocitar către colagen), polimorfism 807 C>T / F224F
  • Gena ITGB3-β3/ integrina (receptor trombocitar al fibrinogenului), polimorfism 1565 T>C / L33P
  • Gena PAI-1/ serpina (antagonistul activatorului tisular al plasminogenului), polimorfism -675 5G>4G
            Analiza genetică evidențiază polimorfismele genelor factorilor de coagulare și ale componentelor sistemului de hemostază, care conduc la sinteza lor anormală sau la afectarea activității funcționale.
Acest lucru ne permite să evaluăm riscurile de dezvoltare a bolilor cardiovasculare și a complicațiilor obstetrico-ginecologice, tromboembolismul, tromboza venoasă și arterială. Screeningul pentru trăsăturile genetice la trombofilie ajută, în stadiile incipiente, la identificarea grupului de risc și la efectuarea de ajustări în managementul tratamentului pacienților.
          Acest test este indicat pacienților cu:
  • - cazuri de tromboembolism ereditar în familie;
  •  cazuri de tromboză în istoricul familiar:
  • tromboză singulară până la vârsta de 50 de ani;
  •  tromboză repetata;
  •  Un caz de tromboză la orice vârstă cu antecedente familiale;
  •  tromboza localizării neobișnuite (portal, mesenteric, vene cerebrale);
  •  Tromboze cu etiologie necunoscută după 50 de ani;
  • utilizarea contracepției hormonale sau a terapiei de substituție hormonală la femeile cu antecedente de tromboză, rude de gradul I de rudenie cu trombofilie ereditară diagnosticată sau cu antecedente familiale de complicații tromboembolice;
  • istoria obstetrical-ginicologică complicată;
  • femeile care planifică sarcină, având antecedente de tromboză, rude de grad I de relație cu trombofilia ereditară diagnosticată sau antecedente familiale de complicații tromboembolice;
  • Situații cu risc ridicat: intervenții chirurgicale masive, imobilizare prelungită, prevenirea complicațiilor trombotice la pacienții cu neoplasme maligne.